Форум

Метод определения сроков овуляции у сук
Сегодня выходит на первый план грамотный, научно-обоснованный подход к племенному разведению собак. Высокая племенная ценность, уникальность некоторых особей является предпосылкой к тщательному обследованию репродуктивного аппарата собак не только с целью исключения инфекционных заболеваний, но и для выявления сроков овуляции. Особенно актуально такое обследование для животных, выезжающих на вязку в другие регионы страны и мира. Многие заводчики понимают необходимость диагностики эструса, однако, дефицит информации, разрозненность данных по этому вопросу, а также недостаток специалистов в ряде случаев приводит к получению недостоверных данных или их неправильной интерпретации. Таким образом, наличие большого спроса на диагностику полового цикла у сук явилось причиной разработки алгоритма его исследования с выведением нормативных показателей и определением параметров овуляции.

Прежде всего, необходимо дать краткую характеристику полового цикла сук. Собака является моноцикличным животным, периодичность цикла составляет от 4 до 12 месяцев. Выделяют следующие стадии: проэструс, эструс, метэструс и анэструс. Начало течки, или проэтрус, проявляется соответствующими изменениями в половом аппарате: отмечается рост фолликулов и увеличение в них количества рецепторов к ФСГ. Клинически эта стадия характеризуется гиперемией слизистой влагалища, отёчностью вульвы, появлением кровянистых выделений. Под влиянием фоллитропина совместно с различными факторами роста происходит стимуляция развития примордиальных фолликулов, а также дифференцировка и пролиферация клеток гранулёзы. Из множества начинающих рост фолликулов созревают лишь единицы. Стадия эструса соответствует половой охоте и овуляции, и именно в этот период следует проводить вязку. Чёткую границу между стадиями уловить трудно, однако во время эструса наблюдается размягчение вульвы, изменение характера вагинальных выделений, готовность животного к спариванию. Затем на месте лопнувшего фолликула образуется полость, которая быстро заполняется гранулёзными клетками, наполненными жёлтым пигментом лютеином. Развитие жёлтого тела происходит в стадию метэструса, не зависимо от того произошло оплодотворение или нет. Как известно, беременность у собак имеет продолжительность 58-65 суток, и после её разрешения начинается стадия анэструса, или полового покоя.

Становится понятным, что подготовка к овуляции протекает под воздействием комплекса факторов, важнейшую роль из которых играют гормоны. Известно, что эстрогены и гестагены регулируют пролиферативные процессы в слизистой оболочке влагалища, которая состоит из многослойного плоского эпителия. В зависимости от степени зрелости, вагинальный эпителий может быть представлен парабазальными, промежуточными, поверхностно-промежуточными и поверхностными клетками. Морфологически они различаются следующим образом: парабазальные клетки самые мелкие, округлой формы, большую часть клетки занимает ядро. Промежуточные приблизительно вдвое крупнее за счёт цитоплазмы, поверхностно-промежуточные клетки истончаются, приобретают несколько угловатую форму. Поверхностные клетки самые крупные, часто безъядерные, содержащие гранулы кератогиалина В фазе анэструса вагинальный эпителий тонкий и бледный, в основном представлен парабазальными клетками. Овуляторный пик характеризуется наибольшей степенью зрелости вагинального эпителия, т.е. выявлением в вагинальном мазке более 90 % поверхностных клеток с наивысшим процентом кариопикноза (более 80%) и большой восприимчивостью к красителю. Развитие жёлтого тела приводит к появлению в мазке большого количества роговых чешуек, лейкоцитов и промежуточных клеток.

В нашем исследовании мы поставили следующие задачи:

• выявить динамику изменения эстрадиола и прогестерона в период проэструса и эструса и сопоставить её с результатами цитологического исследования вагинальных мазков
• подвергнуть анализу данные о сроках вязки и оплодотворяемости в связи с эндокринным статусом и степенью зрелости вагинального эпителия с целью определения оптимальных параметров для спаривания

Исследованию подверглись 22 собаки в возрасте от 1,5 до 7 лет в различные периоды проэструса и эструса. Концентрация прогестерона и эстрадиола в сыворотке крови определялась иммуноферментным методом с использованием анализатора вертикального сканирования и специальных диагностических наборов на базе клинико-биохимической лаборатории СПбГАВМ. Взятие мазков осуществлялось стерильными ватными палочками с бокового свода влагалища, препараты фиксировались специальным красителем Май-Грюнвальда и докрашивались красителем Романовского-Гимза. В мазках высчитывалось процентное соотношение парабазальных, промежуточных, поверхностно-промежуточных и поверхностных клеток из 100 штук.

Анализируя полученные результаты, мы выявили общую закономерность изменения динамики гормонов для всех исследованных животных и выделили следующие фазы проэструса:

1. Фаза относительного покоя. Продолжается от начала пустовки в течение 5-15 суток. Не смотря на выраженные изменения состояния наружных половых органов, уровень прогестерона и эстрадиола находится на относительно низком уровне, не превышая нормативные значения соответствующие стадии анэструса Считается, что в этот период происходит стимуляция развития примордиальных фолликулов, пролиферация клеток гранулёзы под воздействием ФСГ.
2. Фаза начала роста эстрадиола. В течение 2 — 3 суток после первой фазы обнаруживается некоторое повышение концентрации эстрадиола. В этот период фолликулы продолжают созревать и синтезируют достаточное количество эстрогенов, которые, в свою очередь стимулируют выброс лютенизирующего гормона.
3. Фаза начала роста прогестерона.. Под воздействием лютеотропина стероидогенез в фолликулах переключается на выработку прогестерона. В дальнейшем рост прогестерона будет продолжаться, минуя овуляцию, вплоть до стадии метэструса. Однако, выделяется ещё одна фаза:
4. Фаза пика эстрадиола. Продолжительность этой фазы 1 — 3 суток. Резкий выброс эстрогенов обусловлен гибелью большого числа фолликулов, не достигших окончательной зрелости с высвобождением большого количества фолликулярной жидкости. Пиковые концентрации эстрадиола, определяемые в крови, приводят к мощному выбросу гонадолиберина гипоталамусом, а следовательно - и к секреции гонадотропных гормонов, в наибольшей степени ЛГ. Предовуляторный выброс лютеотропина способствует дальнейшему росту уровня прогестерона. Последний вместе с ФСГ и ЛГ индуцирует синтез протеолитических ферментов в яичниках, а комплекс факторов (натрийуретический пептид, ангиотензин II, пролактин, нейропептид У, вазопрессин, брадикинин) увеличивают гидростатическое давление в фолликулярной полости.

Таким образом, под воздействием вышеперечисленных причин фолликулярная стенка разрывается и происходит овуляция. По данным различных исследователей, овуляции соответствует концентрация прогестерона в пределах 35 - 55 нмоль/л. В наших исследованиях мы выявили при повышении прогестерона до 32 - 43 нмоль/л довольно резкое падение уровня эстрадиола.

Результаты исследований представлены в таблице.

ДИНАМИКА ИЗМЕНЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ПРОГЕСТЕРОНА И ЭСТРАДИОЛА В СТАДИЯХ ПРОЭСТРУСА И ЭСТРУСА У СУК

Стадии полового цикла Проэструс Эструс
1 фаза 2 фаза 3 фаза 4 фаза
Продолжительность, сутки
2,2+0,87 2,4±0,14 2,6±0,17 2,2±0,1119 3,2±0,16
Концентрация прогестерона, нмоль/л
1,36+0,08 1,89±0,11 6,76±0,19 20,47±1.43 39,54+1,72
Концентрация
эстрадиола, пмоль/л
230,56±8,4 478,32+18,6 583,24+12,3 1169,07+71,4 634,93+32,8

Необходимо отметить наличие чёткой взаимосвязи между гормональным статусом в конкретный период пустовки и цитологической картиной вагинальных мазков. Так, мазки, взятые в 1 фазу проэструса, характеризовались большим количеством эритроцитов, эпителий был представлен приемущественно парабазальными клетками (67,4+4,3%) и промежуточными (30,5+2,8%). Поверхностно-промежуточные клетки встречались редко (3,1+0,4 %). Во второй фазе соотношение клеток несколько менялось: увеличивалось содержание промежуточных до 47,3+3,7 % и поверхностно-промежуточных до 15,6±2,1 % на фоне снижения процента парабазальных - до 37,1+1,2 %. Дальнейшая эстрогенизация приводит к пролиферации влагалищного эпителия, о чём свидетельствует изменение цитологического профиля на 3 стадии проэструса в сторону повышения процента поверхностно-промежуточных клеток (32,4±2,0 %) и появления единичных поверхностных (4,1+0,32%). Доля промежуточных клеток уменьшалась до 42,0+2,6 % , а парабазальных - до 21,5+1,8 %. Довольно резкие цитологические изменения происходили в 4 фазе - пиковые концентрации эстрадиола приводили к значительному увеличению самых зрелых клеток. Процентное содержание поверхностных эпителиальных клеток составляло в этот период порядка 76,3+4,9 %, многие из которых были безъядерные, Доля поверхностно-промежуточных и промежуточных была 20,4±1,6 % и 3,3+0,3 % соответственно. Следует указать, что многие клетки изменяли восприимчивость к красителю, становясь зозинофильными. И, наконец, во время эструса почти все клетки вагинального эпителия в мазке были поверхностные (91,3+ 3,2%), в большей части из них ядро отсутствовало. И лишь 8,7+0,34 % составляли поверхностно-промежуточные клетки.

Мы провели обследование 17 сук для выявления оптимального дня вязки. Предварительно исключали наличие скрытых инфекций методом ПЦР-диагностики. У каждой особи во время пустовки проводилось определение уровня прогестерона и эстрадиола, а также цитологическое исследование вагинальных мазков. Мы рекомендовали планировать вязку при уровне прогестерона 30-35 нмоль/л и повторно через 48 часов. Процент оплодотворяемости составил 100%.

Концентрация прогестерона является ключевым критерием для определения сроков овуляции, но определение уровня эстрадиола и цитологическое исследование влагалищных мазков вносят ценные уточняющие данные. При первичном обращении во время пустовки рекомендуем делать первый анализ на 3—5 сутки проэструса. При низких концентрациях половых гормонов и отсутствии пролиферативных изменений вагинального эпителия повторное взятие анализов следует проводить через 3-4 суток. Необходимо отметить, что при начале роста прогестерона можно прогнозировать динамику его изменения, сделав как минимум, два исследования с интервалом 48 часов. По данным наших исследований в среднем уровень этого гормона в крови за сутки увеличивается на 6,52 нмоль/л, однако следует придерживаться индивидуальных графиков. Рекомендуем использовать полученные нами данные для практической работы ветеринарных специалистов и кинологов.

Васильева С.В., Васильев Р.М.
Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины